糖尿?。―M）是一種受多重復(fù)雜因素影響的慢性代謝性疾病，遺傳和環(huán)境因素的改變可導(dǎo)致DM 的發(fā)生。DM 常伴有大血管并發(fā)癥（如動脈粥樣硬化、高血壓和中風(fēng)）和微血管并發(fā)癥（如糖尿病腎病、視網(wǎng)膜病和神經(jīng)病變）。

    目前，DM 是繼心血管疾病和腫瘤之后的第三大非傳染性疾病，全球DM的流行給患者和社會帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。近年雖然一些藥物可改善DM患者預(yù)后，但仍有很多患者出現(xiàn)糖尿病并發(fā)癥。

    目前已經(jīng)證實，患者在確診DM之前就已經(jīng)出現(xiàn)糖耐量異常，機(jī)體隨之形成了代謝性記憶，為以后可能出現(xiàn)的DM相關(guān)性血管并發(fā)癥埋下隱患。同時也提示，表觀修飾異?？赡芡ㄟ^影響代謝性記憶的發(fā)生而參與DM 及其并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制。

    目前表觀遺傳修飾包括：DNA 甲基化、組蛋白化學(xué)修飾、染色質(zhì)重塑和miRNA 4 種調(diào)控方式，筆者主要對其中的DNA甲基化、組蛋白化學(xué)修飾在DM及其腎臟并發(fā)癥中的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

    一、表觀遺傳學(xué)的概述

    早在1942 年，康德拉?哈爾?沃丁頓就首次提出了表觀遺傳學(xué)（epigenetics）的概念，幾十年后，霍利迪針對表觀遺傳學(xué)提出了更新的系統(tǒng)性論斷，即表觀遺傳學(xué)是基因的DNA 序列不發(fā)生改變的情況下，基因的表達(dá)水平與功能發(fā)生改變，并產(chǎn)生可遺傳的表型。

    表觀遺傳對生物體各種類型細(xì)胞的生長和分化至關(guān)重要，然而隨著環(huán)境因素的影響或年齡的增長，細(xì)胞正常的表觀遺傳狀態(tài)也會被打破，這就使得表觀遺傳改變在一些復(fù)雜的多因素疾病，如糖尿病腎?。―N）的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要作用。

    1. DNA 甲基化：

    DNA 甲基化是最基礎(chǔ)的基因表觀遺傳學(xué)修飾，不僅調(diào)節(jié)基因的表達(dá)，而且對染色體保持穩(wěn)定起重要作用。在脊椎動物中，DNA 甲基化主要發(fā)生在CpG 島。

    DNA 甲基化由DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶家族（DNAmethyltransferases，DNMTs）催化，將甲基基團(tuán)合成到5'?CpG?3'中胞嘧啶的第五位碳原子上。盡管基因組大部分基因是非甲基化的，但是基因啟動子區(qū)的CpG 島在成長過程中易發(fā)生動態(tài)甲基化改變。

    通常基因啟動子區(qū)域的CpG 島處于非甲基化狀態(tài)，當(dāng)發(fā)生甲基化時，可導(dǎo)致基因沉默的發(fā)生，而產(chǎn)生這一作用的機(jī)制可能與阻礙AP2、NF?κB、c?Myc和E2F等轉(zhuǎn)錄因子與啟動子的結(jié)合、結(jié)合轉(zhuǎn)錄抑制因子（如甲基化結(jié)合蛋白）和改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)有關(guān)。

    2. 組蛋白化學(xué)修飾：

    組蛋白是染色體基本結(jié)構(gòu)核小體的重要組成部分，包括：組蛋白H1、H2（H2A 和H2B）、H3、H4和H5。組蛋白尾部（N端氨基酸殘基）可發(fā)生乙?；?、甲基化、磷酸化及泛素化等多種共價修飾作用，且這些修飾作用大多是可逆的。

    組蛋白化學(xué)修飾通過影響組蛋白與DNA 雙鏈的親和性，從而改變?nèi)旧|(zhì)的疏松或凝集狀態(tài)，或通過影響轉(zhuǎn)錄因子與結(jié)構(gòu)基因啟動子的親和性來發(fā)揮基因調(diào)控作用。

    組蛋白乙酰化（acetylation，Ac）修飾是一個快速動態(tài)修飾的過程，主要是在組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶（histoneacetyltransferase，HATs）和組蛋白去乙酰化酶（histonedeacetylases，HDACs）的協(xié)調(diào)作用下進(jìn)行的。

    HATs 催化組蛋白乙?；?，導(dǎo)致染色質(zhì)結(jié)構(gòu)松散，促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄；而HDACs使組蛋白去乙酰化，導(dǎo)致染色質(zhì)凝聚，抑制基因轉(zhuǎn)錄。組蛋白乙?；识鄻有裕诵◇w上有多個位點可提供乙?；囟ɑ虿课坏慕M蛋白乙?；腿ヒ阴；砸环N非隨機(jī)的、位置特異的方式進(jìn)行。

    組蛋白甲基化是指發(fā)生在組蛋白N 端精氨酸或賴氨酸殘基上的甲基化，由組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶（histonemethyltransferase，HMTs）和去甲基化酶（lysine demethylase，***）動態(tài)調(diào)節(jié)。

    與組蛋白乙?；煌?，組蛋白甲基化更加穩(wěn)定和持久。根據(jù)組蛋白甲基化形式、甲基化位點和被修飾的氨基酸殘基類型的不同，組蛋白甲基化可導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄的激活或抑制。如今，組蛋白修飾在表觀遺傳機(jī)制中起重要作用的觀點，被越來越多的人認(rèn)同，但其具體的作用機(jī)制還沒有被完全認(rèn)識。

    Vaissiere 等發(fā)現(xiàn)，CpG 島DNA 甲基化可促進(jìn)組蛋白去乙酰化，導(dǎo)致相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄抑制，且其通過調(diào)節(jié)H3K9me3的組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SUV39H1的募集可以進(jìn)一步增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄抑制。反之，組蛋白乙?；梢酝ㄟ^抑制DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶與CpG 島的結(jié)合來抑制DNA 甲基化。

    Murr 等發(fā)現(xiàn)DNA 甲基化及其它的組蛋白修飾之間也存在類似的相互作用。表觀遺傳機(jī)制間的相互作用使基因調(diào)控變得更加復(fù)雜，而它們在DM及其并發(fā)癥中的作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步的研究。

    3. 表觀遺傳修飾與代謝性記憶：

    所謂“代謝性記憶”現(xiàn)象是指高糖介導(dǎo)的微血管病變即使在后續(xù)血糖控制達(dá)標(biāo)后仍可持續(xù)進(jìn)展。研究表明，代謝記憶的分子機(jī)制是糖尿病誘導(dǎo)的關(guān)鍵靶細(xì)胞中特定轉(zhuǎn)錄復(fù)合器在血糖恢復(fù)正常后仍持續(xù)啟動，介導(dǎo)后續(xù)核內(nèi)基因表達(dá)譜異常。

    相關(guān)研究提示即使不再存在環(huán)境因素**，組蛋白異常修飾及DNA 甲基化改變也不會恢復(fù)，這種持久的改變可遺傳給后代。

    國外學(xué)者采用染色質(zhì)共沉淀?測序技術(shù)分析了高糖負(fù)荷條件下血管平滑肌細(xì)胞的表觀修飾模式，發(fā)現(xiàn)組蛋白H3K9、H3K14 呈高度乙酰化修飾，并參與了內(nèi)皮功能異常的發(fā)生。

    同時研究還發(fā)現(xiàn)，預(yù)先進(jìn)行高糖培養(yǎng)的系膜細(xì)胞2 d 后再恢復(fù)正常糖濃度培養(yǎng)3、6、9 d，H3和H4 乙?；鞍姿饺暂^正常糖濃度組顯著上調(diào)，與Zhong等在細(xì)胞和糖尿病大鼠記憶模型中的研究結(jié)果相似。以上結(jié)果表明高糖可誘導(dǎo)靶細(xì)胞、染色質(zhì)組蛋白乙?；厮?，且該效應(yīng)在血糖恢復(fù)正常后仍持續(xù)存在。

    有趣的是，即使短期的高血糖**也可以導(dǎo)致長期的表觀遺傳修飾的改變。El?Osta 等通過體外分離培養(yǎng)的上皮細(xì)胞實驗發(fā)現(xiàn)，上皮細(xì)胞暴露于高糖環(huán)境16 h后，在正常糖濃度中培養(yǎng)若干天，其NF?κB、p65表達(dá)持續(xù)增加，同時啟動子H3K4me1標(biāo)志物表達(dá)持續(xù)增加，伴隨組蛋白甲基化酶SET7在p65啟動子區(qū)募集增多。但上述這些改變可以被線粒體電子傳遞鏈阻礙復(fù)合體阻斷。

    總之，目前的研究均表明高糖可以導(dǎo)致靶細(xì)胞表觀遺傳改變，且即使血糖控制在正常水平時，表觀遺傳改變?nèi)钥梢詫?dǎo)致DM 微血管及大血管并發(fā)癥發(fā)病相關(guān)基因持續(xù)表達(dá)。

    二、表觀遺傳調(diào)控在糖尿病及其并發(fā)癥發(fā)展中的作用

    1. DNA 甲基化與糖尿病及其并發(fā)癥：

    研究發(fā)現(xiàn)某些DNA 甲基化參與了DM 發(fā)生。例如DM 狀態(tài)下，轉(zhuǎn)錄輔助活化因子1α（ PGC?1α）啟動子區(qū)DNA 甲基化增加，而PGC?1α表達(dá)下降。

    由于PGC?1α與葡萄糖**胰島素的分泌呈正相關(guān)，提示DNA甲基化修飾通過抑制PGC?1α表達(dá)導(dǎo)致糖尿病db/db 小鼠胰島素分泌減少。

    此外，全基因組研究表明，在高糖條件下細(xì)胞內(nèi)組蛋白DNA 甲基化存在明顯差異，且血管內(nèi)皮細(xì)胞炎性反應(yīng)基因啟動子區(qū)的DNA 甲基化呈現(xiàn)長期持久的變化，提示表觀遺傳調(diào)控可能與糖尿病代謝機(jī)制有關(guān)。

    同樣在DN 和慢性腎臟病（CKD）患者中均發(fā)現(xiàn)有不同程度的DNA 甲基化。DNA 甲基化也受到與腎衰竭相關(guān)的尿毒癥成分的影響。研究表明，CKD 和終末期腎?。‥SRD）患者均可出現(xiàn)高同型半胱氨酸血癥，伴S腺苷同型半胱氨酸升高。

    同型半胱氨酸前體S?腺苷同型半胱氨酸是S?腺苷甲硫氨酸依賴的甲基轉(zhuǎn)移酶的強(qiáng)拮抗因子，同時也是導(dǎo)致DNA 甲基化改變的重要因子之一，在多種高同型半胱氨酸血癥性疾?。ò蚨景Y）中均顯著增高。

    事實上，血清中S?腺苷同型半胱氨酸水平升高在伴有血管疾病的CKD患者中已有報道。上述研究均提示DNA 甲基化異常可能通過影響啟動子區(qū)域的基因結(jié)構(gòu)來參與CKD的發(fā)生發(fā)展。

    最新研究報告顯示，對唾液中提取的DNA 基因進(jìn)行甲基化水平測定，發(fā)現(xiàn)在糖尿病腎?。―N）不同發(fā)展階段，DNA 甲基化修飾存在顯著差異，并可識別糖尿病終末期腎病與無腎臟并發(fā)癥的糖尿病患者，兩組至少有兩個CpG 位點甲基化存在明顯差異。這表明DNA 甲基化水平差異可能在預(yù)測疾病易感性及疾病進(jìn)展方面起作用。

    2. 組蛋白修飾與糖尿病及其并發(fā)癥：

    目前研究表明組蛋白修飾在DM 及其并發(fā)癥中起重要作用。Miao 等發(fā)現(xiàn)體外分離培養(yǎng)高糖**的單核細(xì)胞及DM 患者外周血中的單核細(xì)胞內(nèi)TNF?α和COX?2 基因啟動子上H3K9和H3K14Ac 水平增高，還發(fā)現(xiàn)HAT（pCAF）與NF?κB 信號通路的轉(zhuǎn)錄因子p65 結(jié)合能力增加且促進(jìn)了NF?κB 途徑的轉(zhuǎn)錄活性，提示DM時炎性反應(yīng)相關(guān)基因的過度表達(dá)與組蛋白過乙?；磻?yīng)相關(guān)。

    Boekhoudt 等發(fā)現(xiàn)TNF?α誘導(dǎo)單核細(xì)胞趨化蛋白1（monocyte chemoattractant protein?1，MCP?1）基因啟動子區(qū)發(fā)生高乙?；磻?yīng)，增加Sp1和p65在該調(diào)控區(qū)的結(jié)合而促進(jìn)MCP?1基因表達(dá)。

    上述研究均表明組蛋白高乙酰化修飾與病理狀態(tài)下NF?κB信號通路的活化及下游調(diào)控基因的高表達(dá)密切相關(guān)。Reddy等還發(fā)現(xiàn)氯沙坦作用于體外高糖培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞時，可部分逆轉(zhuǎn)其RAGE、血漿纖溶酶原活化因子抑制劑1（plasminogen activator inhibitor?1，PAI?1）及啟動子MCP?1已經(jīng)增加的H3K9/14乙?；?，為糖尿病腎病提供了更加有效的靶向治療策略。

    Yuan等應(yīng)用體外分離培養(yǎng)的原代腎小球系膜細(xì)胞，以PAI?1 和P21 基因作為研究中心，觀察高糖及轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factor β1，TGF?β1）**對細(xì)胞內(nèi)靶基因啟動子區(qū)組蛋白乙?；揎椨绊懠癏AT/HADC 的表達(dá)變化，觀察與目標(biāo)基因表達(dá)密切相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子Smad2/3和Sp1蛋白乙?；揎椀母淖?，以及這些化學(xué)修飾改變對靶基因轉(zhuǎn)錄水平的影響，并應(yīng)用糖尿病動物模型，觀察高糖環(huán)境以及胰島素治療對腎小球內(nèi)乙?；揎棥⒒虮磉_(dá)以及腎小球肥大的影響。

    結(jié)果顯示，糖尿病大鼠肥大的腎小球及高糖環(huán)境下系膜細(xì)胞內(nèi)PAI?1 和p21 基因啟動子上的組蛋白H3K9 及Smad2/3、Sp1 蛋白發(fā)生高乙酰化修飾，提示高乙?；揎梾⑴cPAI?1 與p21 基因表達(dá)調(diào)控，并與糖尿病性腎小球肥大的發(fā)生有關(guān)。ECM的過度蓄積和腎小管上皮細(xì)胞上皮?間質(zhì)轉(zhuǎn)型有關(guān)，是導(dǎo)致腎小球濾過率下降進(jìn)而出現(xiàn)腎功能損害的主要病理表現(xiàn)。

    有研究證明，HDACs特別是HDAC?2的活性在DN 模型db/db 小鼠體內(nèi)明顯增強(qiáng)，在以TGF?β1 處理過的正常鼠腎小管上皮細(xì)胞中也有相同表現(xiàn)，且HDACs 抑制劑能明顯減少ECM 成分基因的mRNA 和蛋白表達(dá)，并能防止腎小管上皮細(xì)胞上皮?間質(zhì)轉(zhuǎn)型。

    這些研究表明HDACs 在腎臟纖維化和TGF?β1 致纖維化作用相關(guān)的DN等慢性腎臟損傷模型中發(fā)揮重要作用。

    Kaur 等研究發(fā)現(xiàn)，作為體內(nèi)重要的HAT，p300 在高糖處理的內(nèi)皮細(xì)胞NF?κB 信號通路活化以及DM 相關(guān)的腎臟ECM 沉積中發(fā)揮重要作用。

    進(jìn)一步研究表明，高糖增加p300的表達(dá)，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞ECM基因和血管活性因子啟動子區(qū)組蛋白乙?；黾?。有趣的是，在體外分離培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞實驗中p300 抑制劑如姜黃素，能阻礙高糖誘導(dǎo)的糖尿病血管并發(fā)癥相關(guān)基因的表達(dá)。

    遺憾的是，在進(jìn)行小鼠實驗時發(fā)現(xiàn)，無論在誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生DM 之前或之后，進(jìn)食姜黃素均不能減少糖尿病小鼠蛋白尿。

    Francis 等采用小干擾RNA 表達(dá)的腺病毒載體轉(zhuǎn)染BTC3 細(xì)胞系，抑制PDX?1 基因表達(dá)，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染細(xì)胞胰島素基因啟動子鄰近區(qū)域的H3K4me2 水平也明顯下降，同時TNF?α誘導(dǎo)的NF?κB 依賴的炎性反應(yīng)基因，如MCP?1、TNF?α和IL?8 的表達(dá)也顯著減少。

    Li 等通過體外分離培養(yǎng)的人THP?1單核細(xì)胞和HEK293細(xì)胞系實驗發(fā)現(xiàn)，高糖**時，內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)Set7/9 表達(dá)增多，其活化的NF?κB的表達(dá)也增多。

    沉默Set7/9 也能減少NF?κB 途徑P65 亞單位和p300 募集到MCP?1和TNF?α啟動子上，同時MCP?1和TNF?α啟動子上的H3K4me相應(yīng)減少。

    這些結(jié)果提示，Set7/9也許通過啟動子H3K4 甲基化修飾來共激活NF?κB的轉(zhuǎn)錄，從而對糖尿病環(huán)境下的炎性反應(yīng)**物作出反應(yīng)。

    Sun 等發(fā)現(xiàn)采用siRNA 沉默SET7/9 基因，能顯著減少TGF?β1 誘導(dǎo)的ECM 相關(guān)基因表達(dá)，并且發(fā)現(xiàn)TGF?β1抗體不僅能阻礙高糖誘導(dǎo)的ECM 基因的表達(dá)，而且可逆轉(zhuǎn)高糖**時ECM 相關(guān)基因啟動子上H3K4me 的水平及SET7/9的募集。

    Keating等發(fā)現(xiàn)，SET7/9組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶是調(diào)節(jié)組蛋白及非組蛋白賴氨酸殘端甲基化作用的關(guān)鍵酶。因此，Set7/9 也許是控制包括DM 在內(nèi)的炎性反應(yīng)性疾病的一個新的治療靶標(biāo)。

    還有研究發(fā)現(xiàn)，db/db 小鼠的血管平滑肌細(xì)胞中SUV39H1 蛋白水平降低，同時IL?6和MCP?1 啟動子上的H3K9me3 相應(yīng)減少。

    因此，在炎性基因啟動子中，SUV39H1或其介導(dǎo)的H3K9me3的減少，可能導(dǎo)致抑制性蛋白的丟失，從而使各種炎性基因過度表達(dá)，最終導(dǎo)致DM患者的血管病變。

    綜上，特定的靶基因啟動子的表觀遺傳改變也許可以解釋糖尿病腎臟及其它并發(fā)癥的快速進(jìn)展，以及即使在藥物治療或血糖水平已經(jīng)控制時仍存在持續(xù)性代謝記憶的發(fā)生。

    三、總結(jié)

    表觀遺傳在疾病的發(fā)生和發(fā)展中起著十分重要的作用。研究表明高糖**可使基因發(fā)生表觀遺傳改變，如DNA甲基化、組蛋白乙?；⑷旧|(zhì)重塑及microRNAs，從而來調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)炎性反應(yīng)基因及纖維化基因表達(dá)相關(guān)的信號傳導(dǎo)通路，最終使靶細(xì)胞主要的炎性反應(yīng)及纖維化基因表達(dá)失調(diào)。

    這種持續(xù)的表觀遺傳改變也許是代謝記憶的重要機(jī)制。但是，各種表觀遺傳修飾如何作用于復(fù)雜的細(xì)胞循環(huán)途徑仍不十分清楚。不同于不可逆的基因序列改變，表觀遺傳修飾通常是可逆的，這為人們通過藥物干預(yù)病理狀態(tài)下表觀遺傳修飾提供了可能性。

    高通量測序技術(shù)的快速出現(xiàn)和進(jìn)展，便于集中研究DM及其并發(fā)癥的表觀遺傳，必將為DM及其并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制及防止策略帶來新的思路和機(jī)遇。