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用分子檢驗識別急性移植排異反應

2015-03-13 18:21 閱讀:1571 來源:檢驗視界網 作者:學**涯 責任編輯:學海無涯
[導讀] 腎移植的急性排異(AR)增大了移植腎慢性損傷和衰竭的風險,所以急需無創(chuàng)分子測定來改進疾病診斷和病人監(jiān)護。

    腎移植的急性排異(AR)增大了移植腎慢性損傷和衰竭的風險,所以急需無創(chuàng)分子測定來改進疾病診斷和病人監(jiān)護。


    BioMark HD和EP1平臺擁有數字陣列集成流控電路,可實現定量實時聚合酶鏈反應盡管用了免疫抑制療法,大約15%到20%的腎移植患者仍會發(fā)生急性排異,血清肌酐是腎功能的標記物,它水平的升高往往預示著排異,然后進行腎活組織檢查,確認是否發(fā)生了排異。

    美國加利福尼亞大學舊金山分校的科學家與來自多國的科學家合作,在2005年至2012年間收集了美國、墨西哥和西班牙的八座腎移植中心438名成人和兒童腎移植患者的558份外周血樣本,以開發(fā)定量實時聚合酶鏈反應(qPCR)檢驗產品。他們用急性排異或無急性排異(由腎活組織檢查確定)成人的143份樣本開發(fā)了這種檢驗產品,然后用三組患者完成并確證該檢驗產品。

    用基于柱方法的試劑盒提取總核糖核酸(RNA),在安捷倫科技公司(Santa Clara, CA, USA)的2100生物分析儀上用RNA 6000納米芯片實驗室試劑盒測量RNA完整度。在96.96動態(tài)陣列和芯片上執(zhí)行微流控qPCR,通過HX IFC控制器預先加載該芯片并在Fluidigm公司(South San Francisco, CA, USA)的BioMark qPCR平臺上執(zhí)行qPCR.

    科研小組評估了43個基因中10個基因的差異表達,選擇已確證的同樣10個基因作為標記物,用標準化的臨床實驗樣本收集和處理程序診斷外周血中急性排異的。為了提高143份成人樣本的急性排異診斷準確度,用多種統計建模方法又找到7個基因,提高了基因組合鑒別急性排異與非急性排異樣本的準確度,所以最終的選擇是17個基因。該測定名為kSORT,能區(qū)分急性排異風險高和風險低的患者。無論任何年齡、移植后經過的時間以及樣本源,kSORT測定都能夠檢測血液中的急性排異,無需額外的數據歸一化。

    該研究的論文發(fā)表于2014年11月11日的《公共科學圖書館》雜志《醫(yī)學》分冊上。作者總結說,kSORT測定是一種簡單、穩(wěn)定、可用于臨床的血液檢驗。他們正在用 kSORT進行一項前瞻性觀察實驗以及另一項前瞻性隨機雙盲臨床干預實驗,以確定移植后如何繼續(xù)應用kSORT,輔助現有的臨床規(guī)程指南分類病人的免疫風險、藥物載荷和活檢要求。


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