印第安納大學(xué)的生物化學(xué)家發(fā)現(xiàn)的新化合物，在用于影響乙型肝炎病毒共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（covalently closed circular DNA,cccDNA）的生命周期中具有一定的應(yīng)用潛力，從而為乙肝治愈的研究帶來(lái)新希望。
 

    1 cccDNA與乙肝

    乙型肝炎病毒（HBV）的基因組（rcDNA）進(jìn)入到細(xì)胞核后，rcDNA在病毒蛋白和宿主細(xì)胞因子的幫助下修復(fù)成共價(jià)閉合的松弛環(huán)狀雙鏈DNA（covalently closed circular DNA,cccDNA）。前基因組RNA（pgRNA）出核后，在胞質(zhì)中形成ε pgRNA,并與病毒的聚合酶P蛋白共價(jià)結(jié)合，誘發(fā)核衣殼化。與多數(shù)其他的病毒DNA的機(jī)制不同，HBV cccDNA通過(guò)pgRNA的反轉(zhuǎn)錄進(jìn)行**，而cccDNA主要以微小染色體的形式存在于肝細(xì)胞內(nèi)，且其半衰期很長(zhǎng)（33——100天），細(xì)胞核內(nèi)的最長(zhǎng)壽命可達(dá)14年。只要肝細(xì)胞中還存在，cccDNA乙肝病毒的**就不會(huì)停止，并與病毒蛋白裝配成新的完整HBV,以芽生的方式再感染健康的肝細(xì)胞，而這是導(dǎo)致乙肝復(fù)發(fā)的根本原因。因此，盡管每個(gè)肝細(xì)胞內(nèi)只有約5——50個(gè)cccDNA拷貝，但是只要這些cccDNA池穩(wěn)定，就可以使得病毒的持續(xù)感染延續(xù)，因而清除肝細(xì)胞內(nèi)的cccDNA是乙肝徹底治愈所必需的。

    目前，乙肝治療用藥（包括核苷類似物）的機(jī)制主要是通過(guò)抑制DNA多聚酶，降低外周血的DNA載量。然而，這些藥物大多只能在肝細(xì)胞的細(xì)胞漿中發(fā)揮作用，對(duì)于細(xì)胞核內(nèi)的cccDNA作用有限。也就是說(shuō)，外周血中HBV DNA數(shù)量的明顯減少并不代表肝細(xì)胞內(nèi)的HBV DNA數(shù)量的同步降低，往往“治標(biāo)不治本”.就目前而言，只有γ干擾素（干擾素分α、β、γ型，其中α-干擾素仍是目前DNA聚合酶抑制劑拉米夫定、阿德福韋、恩替卡韋、替比夫定、替諾福韋外的最主要的慢性乙型肝炎療法，但是由于長(zhǎng)期反應(yīng)效果差和較強(qiáng)的副作用而被禁止）能夠進(jìn)入肝細(xì)胞核內(nèi)，抑制cccDNA的**，并縮短cccDNA的半衰期。但是，目前γ干擾素在臨床應(yīng)用中對(duì)于cccDNA的抑制效果尚不明確，而清除肝細(xì)胞核里面的cccDNA尚未有藥物能夠?qū)崿F(xiàn)，這構(gòu)成了乙肝治愈研究的瓶頸。

    因而，現(xiàn)有藥物不能有效清除病毒cccDNA,而且一些藥物在停用后存在HBV DNA和轉(zhuǎn)氨酶水平的反彈，如果長(zhǎng)期用藥又有可能導(dǎo)致病毒變異和耐藥性的產(chǎn)生，以致至今最多只有3%——5%的乙肝可以治愈。

    2 核心蛋白變構(gòu)調(diào)節(jié)劑（CpAMs）的研究

    在印第安納大學(xué)的研究中，生物物理學(xué)的研究者發(fā)現(xiàn)了一些小分子核心蛋白變構(gòu)調(diào)節(jié)劑（CpAMs），可以選擇性且有效地降低病毒載量和病毒抗原。核心蛋白（病毒**所需裝配的病毒核心顆粒，Cp）是涉及多個(gè)步驟、HBV生命周期中高度保守的病毒蛋白，CpAMs可改變HBV核心蛋白。

    在此之前，研究得較多的化合物是異芳基—二氫嘧啶（heteroaryldihydropyrimidines HAPs），通過(guò)誤導(dǎo)正常核衣殼（HBV病毒吸附至細(xì)胞后，脫去包膜進(jìn)入到肝細(xì)胞內(nèi)，并脫衣殼）的形成，來(lái)抑制病毒**，從而使得核心蛋白水平下降。相對(duì)于核苷類似物的治療方案，利用HAP來(lái)抑制病毒衣殼蛋白的形成具有更好的穩(wěn)定性。

    在目前的研究中，德國(guó)拜耳公司研究中心的兩種化合物Bay 38-7690和Bay 39-5493研究得較多，其中氚標(biāo)記Bay 39-5493與HBV核心顆粒的結(jié)合后，對(duì)人乙肝病毒具有特異性、對(duì)應(yīng)選擇性和可逆性。Bay 38-7690能夠阻止核心顆粒的產(chǎn)生，但不影響核心蛋白水平。

    3 乙肝的基因治療

    為了針對(duì)性地抑制，也有不少研究者將目標(biāo)投向了基因治療和治療性疫苗的研究中。

    其中，在基因治療方面，RNAi研究得較多，不少研究者致力于將該機(jī)制變成治療手段，也有不少實(shí)驗(yàn)室研究成功的報(bào)道。但是，這些研究多基于體外的實(shí)驗(yàn)展開(kāi)，具體應(yīng)用至臨床時(shí)，投遞到體內(nèi)靶細(xì)胞效率不高的問(wèn)題幾乎是共性的問(wèn)題：合成的SiRNA在肝細(xì)胞內(nèi)的存留時(shí)間短，而用質(zhì)粒表達(dá)的RNAi在體內(nèi)投遞的效率很低（僅能到達(dá)少部分肝細(xì)胞，這對(duì)于清除幾乎所有的肝細(xì)胞內(nèi)的HBV而言未達(dá)到預(yù)期），而AAV等載體可被宿主體內(nèi)抗體中和失效，或誘發(fā)可致命的宿主免疫反應(yīng)，存在引發(fā)腫瘤等風(fēng)險(xiǎn)。

    4 激活機(jī)體的免疫應(yīng)答

    目前，人類尚無(wú)有效且廣泛使用的方法，能夠打破免疫耐受，激活機(jī)體正常的對(duì)HBV的免疫應(yīng)答，從而在保護(hù)肝細(xì)胞的同時(shí)清除病毒使患者痊愈。

    至今，國(guó)內(nèi)外已經(jīng)開(kāi)展了較多治療性疫苗研究，包括蛋白疫苗、核酸疫苗、T細(xì)胞表位肽疫苗等，但大多處于臨床前研究或Ⅰ期、Ⅱ期臨床研究階段。而且，從已獲得的效果來(lái)看，盡管一些研究過(guò)的治療性疫苗能夠誘導(dǎo)機(jī)體的免疫反應(yīng)，但是其在血清學(xué)改變和病毒抑制的效果上仍然不穩(wěn)定，因此盡管重慶啤酒、白云山、華麗家族和深圳康泰等的研發(fā)都在進(jìn)行，但至今尚無(wú)有效的治療性疫苗上市。實(shí)現(xiàn)清除cccDNA、打破免疫耐受的道路仍然任重道遠(yuǎn)。